质粒可以携带一个或多个抗生素抗性基因，这些基因会使携带它们的细菌表现出相应的抗药性。质粒上存在抗生素耐药基因，使研究人员可以通过人工筛选（即在抗生素存在下生长细菌），从不含该质粒的细菌中轻易地分离出含有该质粒的细菌。
       Luria broth(LB)是一种富含营养的培养基，通常用于培养实验室中的细菌。在LB中加入琼脂会形成一种凝胶，细菌可以在上面生长，因为细菌不能消化琼脂，却可以吸收LB的营养。在这种凝胶中加入一种抗生素，可以选择对这种抗生素具有耐药性的细菌（是由携带抗生素抗药性基因的质粒赋予的）通常。下文将讲述如何制作琼脂固体LB培养基。

实验设备
高压灭菌锅
水浴锅
移液器
无菌枪头

平板（无菌培养板）

试剂及准备
1.配方：37 g预混合粉末，包括：
5.0 g 克酵母抽提物
10.0 g 酪蛋白蛋白胨
10.0 g 氯化钠
12.0 g 琼脂
1 L 无菌水

2.选择所需尺寸的无菌培养板-我们通常使用60 mm x 15 mm的培养板，可容纳5-10 mL培养基，可单独区分最多100个菌落
*提示*如需要筛选大量菌落，建议使用较大的培养皿。许多实验室使用100 mmx 15mm的平板，可以容纳10-15毫升琼脂。

3.高压灭菌：烧瓶、无菌移液管

4.在冰上融化抗生物储存液

按照适当浓度添加抗生素。具体用量见下表：



操作步骤：
1.1 L的培养基需要37 g预混合的LB琼脂粉。具体需要多少培养基，需要计算一共需要制备多少培养板。
例如：需要制作20个平板，60 mm x 15 mm的培养板最多可容纳10 ml培养基，所以总共需要200 ml的培养基。
值得注意的是，实际上在配置培养基时会多配一些（~220 ml），以防溢出或测量中出现的小误差。也就是说，一般情况下最终会得到比预计略多几个平板。
因此，对于220 ml LB固体培养基，需要：（37 g预混合LB琼脂粉/L）x（0.220 L）=8.14 g预混合LB琼脂粉。

2.将测得的LB琼脂粉末转移到适当大小的瓶子中进行高压灭菌。1 L的锥形瓶最多可制备400 ml固体LB培养基，500 ml的锥形瓶最多制备200ml固体LB培养基。保留额外的空容量是必要的，以防止熔融琼脂在高压灭菌过程中沸腾溢出瓶外。

3.将无菌水（在本例中为220 ml）加入瓶中，并混匀成培养基/琼脂胶体。

4.用瓶盖或铝箔盖住瓶口（但不要做密封！）用高压灭菌胶带标记。使用实验室胶带在瓶子上贴上姓名、日期和瓶子内容物及其它相关信息。

5.将凝胶混合物放入高压灭菌锅中，在20 psi，121℃的条件下运行至少30分钟。高压将防止凝胶混合物在高温下沸腾。

6.当培养基在灭菌时，应该准备好到平板的设备：
①有酒精灯的空实验台。在工作台上喷洒70%乙醇溶液，并用纸巾擦拭。
②准备适当数量的平板。
③在培养皿上贴上日期和培养基标签，包括抗生素的标识。
④将酒精灯放在将要倒的平板一侧——确保为实验操作留出空间。
⑤准备好抗生素。
⑥准备60℃水浴，用足够的水浸没3/4的装有熔融凝胶混合物的瓶子。

提示：在添加抗生素之前，需要在水浴中冷却熔融琼脂。60℃是一个合适温度，因为熔融琼脂在这个温度下会保持液态，但大多数抗生素在这个温度下不会分解。抗生素的具体情况需要参考抗生素说明书。

7.从高压灭菌锅中取出熔化的琼脂培养基混合物。

8.将琼脂培养基混合物放置在60℃水浴中。
提示：应该将琼脂培养基混合物放在水浴中至少5分钟。期间不要让水接触瓶子的颈部或顶部，因为这些水不是无菌的。
冷却后的琼脂摸起来应该是温的；根据经验，如果你不能徒手将之从水浴中取出，则该温度对抗生素是不利的。为了确保培养基处于合适的温度，可以使用温度计进行准确的温度测量。

9.在超净工作台中点燃酒精灯，并使用无菌技术将抗生素稀释到培养基中。

10.轻摇锥形瓶，确保抗生素在培养基中充分混匀。

11.在酒精灯的火焰旁边打开平板，倒入5-10 ml的培养基。旋转平板，去除气泡，确保培养基均匀分布在平板底部。
提示：如果在倒平板的过程中，瓶中的培养基出现固话应该立即停止倒板，重新混合凝胶。如果是没有任何抗生素的平板，也可以通过再次高压灭菌或微波炉加热的方式使之融化。

12.将平板静置固化。

提示：平板在室温下固化大约需要30分钟。我们可以将它们放在室温下过夜，让它们干燥。经过一夜的干燥，将平板放在一个带有吸水材料的袋中，以减少冷凝。4℃下储存。