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一、概述
Magarose-ProA（ProG、ProA/G、ProL）抗体纯化磁珠系列产品是由NHS活化的磁性琼脂糖微球与Protein A（or Protein G）共价结合形成的复合微粒。与当前国际免疫磁珠市场上同类产品相比，该产品具有更高的抗体结合能力和较低的蛋白非特异吸附率，洗脱条件更均一，一步纯化即可从血清样品中分离出纯度大于90%的抗体。本产品为微米级磁性微球，熟练操作可在15 min内完成抗体吸附过程，30 min内完成抗体纯化流程。本产品可重复使用，适用于血浆、腹水、组织培养上清液等样品中的抗体纯化，也可用于抗体固定及其它相关研究。用户可根据目标抗体的种属来源及亚型选择磁珠的类别，Magarose-ProA（roG、ProA/G、ProL）磁珠与不同抗体的亲和性比较参见http://www.purimagbead.com/html/4309815423.html。
二、产品特性
产品名称
Magarose-ProA （ProG、ProA/G、ProL）
货号
PMAG008
磁珠浓度
25% (v/v) in PBST（含0.05% NaN3）
配基密度
/
介质
6%交联磁性琼脂糖
粒径
20-45μm
配体结合
~40 mg Human IgG /ml磁珠
保存
2~8℃保存一年
注：磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性相关，此处仅作参考值。
三、使用方法
1. 缓冲液
Binding/Washing buffer PBST（pH 7.2~7.4）: 137 mM NaCl，2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2.0 mM KH2PO4, 0.1% Tween-20;
Elution buffer: 100 mM Glycine, 0.1% Tween-20, pH 2.5;
Neutrilization buffer: 1.0 M Tris-HCl, pH 9.0;
2. 操作流程 (以纯化人血清IgG为例)
1) 样品处理：取人血清100 μL至1.5 mL EP管中，接着加入900 μL Binding/Washing buffer，充分混匀。
2) 磁珠预处理：将抗体纯化磁珠漩涡振荡30 s，使磁珠充分重悬；取100 μL 10%（v/v）磁珠悬液置于另一新的1.5 mL EP管中。对磁珠悬液进行磁性分离，弃上清液，用1 mL Binding/Washing buffer洗涤2次，磁性分离，管中磁珠可直接用于抗体分离。
注：该步骤磁珠的用量可根据磁珠对目标抗体的最大结合量进行调节，当目标抗体的浓度大于150 μg/mL时，用户可取1.2~1.5倍磁珠用量（计算方式：如1.5*样品中目标抗体含量/磁珠最大结合量），若目标抗体浓度过低，如低于70 μg/mL时，客户为了提高抗体回收率，可增加磁珠用量，如提高至3倍磁珠用量。
3) 抗体吸附：在步骤2预处理的磁珠管中加入步骤1处理的样品溶液，漩涡振荡均匀，在室温下（约25℃）置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP管，促使样品和磁珠充分接触并吸附，翻转约15 min后进行磁性分离，移弃上清液。
4) 磁珠洗涤：向EP管中加入1 mL Binding/Washing buffer，振荡重悬磁珠后进行磁性分离，移弃上清液；该操作重复3次。
5) 抗体洗脱：在上述完成磁珠洗涤的EP管中加入0.5~1.0 mL Elution buffer，用移液器吹打或者涡旋震荡下迅速重悬，然后在室温下（约25℃）置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP管，翻转10 min后进行磁性分离，收集上清液至新的EP管。
注：该步骤Elution buffer用量，建议客户使最终洗脱的抗体浓度控制在0.6~1.2 mg/mL，此时第1次洗脱条件中95%以上的抗体将被洗脱下来；若Elution buffer用量过少，会导致部分抗体在第1次洗脱时仍然留在磁珠上，从而导致抗体回收率降低。
6) 抗体中和：在步骤5抗体洗脱液中加入一定量的Neutrilization buffer，一般为抗体洗脱体积的1/10，最终使洗脱的抗体pH值保持中性环境，以利于维持抗体的生物活性，避免抗体失活。
7) 磁珠后处理：使用后的磁珠用Elution buffer洗涤2次，磁性分离，弃上清液；接着用Binding/Washing buffer洗涤3次，磁性分离，弃上清液，加入100 μL Storage buffer重悬磁珠 ，置于2~8℃保存。
3. 磁珠再生
1) 磁珠多次使用后会有沉淀蛋白、强疏水性蛋白、脂蛋白等杂质非特异性吸附到磁珠上，为了保证磁珠的使用效率，建议持续使用5次后进行磁珠再生处理。
2) 按每1 mL 25%（v/v） 磁珠加入2 mL 1%（v/v）Triron X-100磁珠再生缓冲液，振荡均匀，在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转混合，10 min后进行磁性分离，弃上清液。
3) 立即加入1 mL Binding/Washing buffer进行重悬，然后磁性分离，弃上清液，重复该操作3次。
4) 加入1 mL Storage buffer重悬磁珠，2~8℃保存。
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