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链霉亲和素琼脂糖磁珠
（Magarose-Streptavidin）
一、概述
Magarose-Streptavidin是PuriMag公司开发的表面包被链霉亲和素的琼脂糖磁性微球。链霉亲和素（Streptavidin）是来源于Streptomyces avidinii的分子量为66 kDa同源四聚体蛋白，与亲和素（avidin）具有相似的生物素（biotin）亲和特性（Ka∼1015 M-1）。链霉亲和素是略显阴离子特性（PI=5.6）的非糖基化蛋白，因而相对于亲和素（avidin， PI=10.5）具有更低的非特异性吸附。生物素化的生物分子与链霉亲和素的结合是不可逆的。需要在低pH和变性剂等非常苛刻的条件下，才能完全除去生物素化的分子。这使Magarose-Streptavidin磁珠在各种亲和捕获应用中非常有用，包括捕获生物素化的大分子和复合物，例如蛋白质、抗体、凝集素、核酸、受体和配体。Magarose-Streptavidin磁珠也可用于直接纯化脱硫生物素化的蛋白质和多肽，可在温和条件下使用与生物素的竞争性置换从磁珠上洗脱目标分子。Magarose-Streptavidin磁珠由是内含超顺磁性颗粒的6％琼脂糖交联微球，并共价结合链霉亲和素组成，直径为20~45 μm。磁珠能在磁场下快速从悬浮液分离，显着加速操作和实验的重现性，以及对感兴趣的蛋白质的更准确的定量。
二、产品特性
产品名称
Magarose-Streptavidin
货号
PMAG004
磁珠浓度
25% (v/v) in PBST (含0.05% NaN3)
配基密度
~ 6 mg Streptavidin / ml磁珠
介质
6%交联磁性琼脂糖
粒径
20-45μm
配体结合
> 175 nmoles of biotin /ml磁珠
> 10 mg of biotinylated BSA /ml磁珠
保存
常温运输，2~8℃保存两年
注：磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性相关，此处仅作参考值。
三、使用方法
1. 产品特点
w 生物素结合位点丰富；
w 非特异性吸附低；
w 适用于生物素标记（或脱硫生物素标记）的蛋白、多肽、核酸、药物等生物配体液相捕获。
2. 缓冲液
1）核酸捕获
- B&W Buffer (2X)：10mM Tris-HCl (pH 7.5), 1mM EDTA, 2M NaCl；
- B&W Buffer (1X)：5mM Tris-HCl (pH 7.5), 0.5mM EDTA, 1M NaCl；
2）RNA 捕获
- Solution 1：0.1M NaOH, 0.05M NaCl（DEPC 处理）；
- Solution 2：0.1M NaCl（DEPC 处理）；
3）蛋白/抗体捕获
- PBS Buffer, pH 7.4 (or PBST Buffer, PBS pH 7.4, 含 0.01%(v/v) Tween 20；or PBS/BSA Buffer, PBS pH 7.4, 含 0.1%(v/v) BSA)。
3. 操作流程
3.1磁珠洗涤
1) 根据生物素配体结合量参数，计算磁珠使用体积（建议最小使用量不要少于20ul，取样太少易导致不同次加入的磁珠体积不一致）；
2) 将磁珠重悬均匀（e.g.涡旋震荡 30s，吹打或旋转混合 5min。磁珠重悬方法下同），并转移所需磁珠体积至一新 ep 管中；
3) 加入等体积（或至少 1mL）B&W Buffer (1X) （核酸捕获）或 PBS Buffer（蛋白/抗体捕获），将磁珠重悬均匀；
4) 使用磁力架磁吸至磁珠吸附完全，吸弃上清液；
5) 重复 step 3 和 4 三次。
3.2 DNA 捕获
1) 向洗涤好的磁珠管中加入双倍原始磁珠体积的 B&W Buffer (2X)；
2) 加入等体积的生物素化 DNA 的去离子水溶液至上述 ep 管中；
3) 室温混匀，孵育 20~30min；
4) 磁性分离，吸弃上清液；
5) 使用 B&W Buffer (1X)清洗上述磁珠-核酸复合物 2~3 次；
6) 直接进行后续核酸释放实验，或加入一定体积 B&W Buffer (1X)重新分散、待用。
3.3 RNA 捕获
1) 向洗涤好的磁珠管中加入大于磁珠原始体积的 Solution 1，涡旋振荡 2min，磁吸并
2) 吸弃上清液（该清洗步骤操作两次）；
3) 使用 Solution 2，按照 step 1 的方法，清洗磁珠 1 次；
4) 将磁珠重新分散于双倍原始体积的 Solution 2 中；
5) 加入等体积的生物素化 RNA 的去离子水溶液至上述 ep 管中；
6) 室温混匀，孵育 20~30min；
7) 磁性分离，吸弃上清液；
8) 使用 Solution 2 清洗上述磁珠-核酸复合物 2~3 次；
9) 直接进行后续核酸释放实验，或者加入用一定体积 Solution 2 重新分散待用。
3.4 蛋白/抗体捕获
1) 向洗涤好的磁珠管中加入一定体积 PBS Buffer 和生物素化的蛋白或者抗体溶液；
2) 室温混匀，孵育 30min；
3) 磁性分离，吸弃上清液；
4) 使用 PBS/BSA Buffer 清洗 3~5 次，用一定体积的 PBS Buffer 进行保存。
3.5核酸释放
将 3.2 或 3.3步骤得到的核酸磁珠复合物的 ep 管磁性分离吸弃上清液，然后用 10mM EDTA, pH 8.2, 95%甲酰胺溶液在 65℃下孵育 5min（或者 90℃下孵育 2min），可以将生物素化核酸与磁珠实现分离；
3.6 蛋白/抗体释放
将磁珠与生物素化蛋白复合物用用 0.1% SDS 溶液煮沸 5min 可以将生物素化蛋白从磁珠上解离。
3.7 纯化脱硫生物素化生物分子
1) 向洗涤好的磁珠管中加入一定体积 PBS Buffer 和脱硫生物素化的蛋白或者抗体溶液；
2) 室温混匀，孵育 30min；磁性分离，吸弃上清液；使用 PBS/BSA Buffer 清洗3~5次，吸弃上清液。
3) 为了洗脱脱硫生物素化的生物分子，在PBS中加入200μl的2mM生物素。将溶液加入到磁珠中，在室温下孵育并混合至少15分钟。
